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Aujourd’hui nous allons détailler la procédure de comptage sur cellule de Malassez. Comment? D’abord nous allons voir ce qu’ est cette cellule et où s’en procurer. Puis, voir pour quels échantillons la cellule est recommandée, et comment est constitué le quadrillage de cette cellule. Ensuite, nous verrons comment charger la cellule, quelles sont  les règles de comptage et enfin,  comment effectuer la numération proprement dite et faire le contrôle qualité de notre comptage. 

Sommaire

• Qu’est ce que c’est que la cellule de Malassez, et où s’en procurer? 
• Échantillons pour lesquels cette cellule est recommandée 
• Comment charger la cellule  
• Règles de comptage 
• Quadrillage de la cellule de Malassez
• Formule de comptage de la cellule de Malassez
• Comment faire le contrôle qualité de notre numération 

Qu’est ce que c’est que la cellule de Malassez 

La cellule de Malassez ou encore hématimètre de Malassez est une lame de verre creusée selon des dimensions bien précises. Elle permet de faire la numération d’éléments, essentiellement des cellules dans un volume de 1mm³. 

NB: Nous prévoyons d’écrire un article prochainement sur le calcul des paramètres de la numération formule sanguine, lorsque l’on a pas d’automate sous la main.

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Échantillons pour lesquels la cellule est recommandée 

Les échantillons pour lesquels la cellule de Malassez est recommandée, sont les liquides à forte densité cellulaire. Par  exemple le sang,  pour le comptage de leucocytes ou des hématies. Il est également possible de compter les spermatozoïdes dans le sperme par exemple.  

Mais comme il est dit ici [1], le choix dépend surtout de vos habitudes. Simplement, le quadrillage de la cellule de Malassez et son petit volume permettent de compter plus vite lorsque le liquide a une forte densité cellulaire selon notre expérience personnelle. 

Comment charger la cellule de Malassez

Il s’agit tout simplement de mettre l’échantillon à diluer entre une lamelle et le quadrillage de la cellule de Malassez. En effet, comme nous le verrons plus loin, le quadrillage de la cellule de Malassez présente un volume dans lequel nous allons compter. 

S’ il est  nécessaire de diluer l’échantillon dont  nous voulons compter les éléments,  il faudra tenir compte du facteur de dilution au moment du calcul du nombre de ces éléments.

Plus précisément, il s’agit de: 

• Diluer  l’échantillon à analyser dans un liquide  approprié par exemple dans un tube à hémolyse. La dilution idéale vise à obtenir 10 éléments par rectangles [2].
• Poser la cellule sur une  surface plane.
• Passer un bout de doigt mouillé sur le bon de la zone contenant le quadrillage puis faire glisser  une la même pour qu’elle adhère à la zone humidifiée.Il est également possible de simplement poser la lamelle  sur le quadrillage car lorsqu’on va mettre la suspension,  celle-ci va faire adhérer la lamelle à la cellule.  
• Remettre en suspension les cellules à compter
• Grâce à une pipette Pasteur ou une micropipette, déposer une goutte de la suspension entre la lamelle et la cellule. Le liquide va entrer par capillarité dans l’espace entre l’espace entre la cellule et la lamelle.  Éviter de remplir l’espace entre les rigoles.  La lamelle  risque de se retrouver décollée de la cellule
• Attendre que les éléments  sédimentent pendant au moins 5  minutes avant de réaliser le comptage.

Règles de comptage  

Les règles  de comptage stipulent qu’ il faut compter  les cellules qui se trouvent à l’intérieur du quadrillage et uniquement celles  qui sont sur les lignes supérieuress et gauches [1]. Si l’on comptait également les cellules qui se trouvent sur les lignes inférieures et droites, l’on compterait  deux fois une cellule. et le compte serait faussé.  

Quadrillage de la cellule de Malassez

Pour bien faire la numération avec la cellule de Malassez,  il faut comprendre que une bande a un  volume de 1/10 mm3, et un rectangle a un volume de 1/100 mm³. La  numération se fera  au mm³.

En effet, comme nous le montre l’image suivante, le quadrillage de la cellule de Malassez. fait au total 1 mm³, soit 1  µL.  Le quadrillage est divisé en  10 bandes, que l’on aille dans le sens horizontal ou vertical. 5 de ces bandes sont subdivisées en bandes plus petites. Et les cinq autres ne le sont pas. C’est pourquoi les bandes, divisées ou non,  ont un volume de 1/10 mm³.

 Le quadrillage en lui-même est également  divisé en 100 petits rectangles dont  50 sur  100 sont subdivisés  en 20 petits carrés. C’est pourquoi les rectangles ont chacun un volume de 1/100 mm3. Qu’ils soient subdivisés ou pas.  

Formule de comptage avec la cellule de Malassez

Comptage dans les bandes 

La formule veut que  nous comptions dans 5  bandes subdivisées par exemple, ou pas et nous faisons la moyenne par bande.  Puis il faudra multiplier cette  moyenne par 10 et par l’inverse de notre  facteur de dilution. Ainsi nous trouvons la numération par mm3. 

n=N/b x 10x d 

• n : nombre d’éléments par mm3 ;
• d :  coefficient de  dilution (inverse du facteur de dilution), 
• N: nombre d’éléments comptés  dans les bandes
• b: nombre de bandes dans lesquelles on a compté

Comptage dans les rectangles

 Dans ce cas nous comptons par exemple 5 rectangles (en diagonale pour avoir une bonne répartition).. Puis nous faisons la moyenne par rectangle  et nous multipliions cette moyenne par 100 et par l’inverse du facteur de dilution.  Nous avons ainsi la numération par mm3. 

n=N/r x 100x d 

• n : nombre d’éléments par mm3 ;
• d :  coefficient de  dilution (inverse du facteur de dilution), 
• N: nombre d’éléments comptés  dans les bandes
• r: nombre de rectangles dans lesquelles on a compté

Pour ce qui concerne le sang, généralement les leucocytes sont comptés dans les bandes et les hématies dans les rectangles. 

Comment fait-on le contrôle qualité de notre numération  

Les règles de validation du contrôle qualité

Pour  chaque échantillon le contrôle qualité obéit à 2 règles: 

•  faire 2 comptages;
•  la différence des deux comptages doit être inférieure à 20 % sinon le comptage doit être recommencé.

Comment calculer la différence en %

La formule suivante est à appliquer [4]: 

• Soit n1 le  nombre trouvé au comptage 1
•  Soit n2  le  nombre trouvé au comptage 2
•  Nous calculons d’abord la différence entre les deux soit n1-n2
• Puis nous calculons  la moyenne des deux comptages soit n1 + n2 / 2
• Enfin nous calculons le rapport de la différence à la moyenne  x 100

Bibliographie

1.Gille Y. (2011). Cellule de Nageotte. Bioltrop. Repéré à http://www.bioltrop.fr/spip.php?article359

2. Biobanque Univ Tours. (s.d). Comptage sur cellules de Malassez et de Thoma.

3. Science Service. ( s.d.). Broschure Marienfeld Counting chambers. Repéré à https://is.muni.cz/el/sci/jaro2019/Bi8180c/um/Counting_Chambers_en.pdf

4. Cheesbrough M. (2010). District Laboratory Practice in Tropical countries. Part 2. 2nd edition update. Cambridge University Press

Avertissement: La procédure ci-dessus décrite est un exemple. Pour la rendre applicable dans votre laboratoire, elle doit être validée par votre directeur technique.

Les auteures:

-Rédigé par Renée A. LEYEBE, titulaire d’une Licence en Sciences de la Santé, option Analyses Médicales

-Validé par Petronile NGO ETOUNDE, titulaire d’un Master en Microbiologie et Immunologie.